إعداد الخرطوشة الجافة

يتم شحن مستهلكات MiSeq i100 Series وتخزينها فِي درجة حرارة الغرفة. الإذابة غير مطلوبة. قبل تحميل المكتبات فِي الخرطوشة الجافة، قم بتخفيف المكتبات وإضافتها فِي PhiX اختياريًا. كما يتم تحلل المكتبات تلقائيًا عند تحميلها على الجهاز.

قم دومًا بإجراء تحليل التحكم بالجودة وتحسين التركيز الخاص بتحميل مكتبتك.

تخفيف المكتبات

1.  استخدم مقصًا لفتح حزمة رقاقة الخرطوشة الرطبة لاستعادة أنابيب Resuspension Buffer (RSB) وLibrary Denaturation Buffer (محلول تغيير طبيعة المكتبة) (KLD). ضع الأنابيب جانبًا.

2.  قم بتخفيف المكتبات إلى تركيز تحميل يبلغ 10 أضعاف مع حجم إجمالي يبلغ 30 ميكرولترًا باستخدام RSB.

مثال: بالنسبة لتركيز التحميل النهائي البالغ 100 بيكومولار، قم بتخفيفه إلى 1 نانومولار.

3.   قم بالتقليب عند أعلى إعداد لمدة 3 ثوانٍ، ثم قم بالطرد لفترة وجيزة.

4.  [Optional] (اختياري) زيادة PhiX كما يلي.

a. بالنسبة إلى زيادة PhiX المقصود بنسبة ≥10%، خفف PhiX إلى 10 أضعاف تركيز تحميل المكتبة مع RSB وادمجه مع محلول المكتبة 10 أضعاف ليصل الحجم الإجمالي إلى 30 ميكرولتر. استخدم الأحجام المناسبة مِن PhiX  والمكتبة لإنتاج النسبة المئوية المطلوبة لزيادة PhiX.

مثال: أضف 3 ميكرولتر مِن 10 أضعاف محلول PhiX إلى خليط مكتبات تركيز 27 ميكرولتر 10 أضعاف للحصول على 30 ميكرولتر 10 أضعاف خليط مكتبة مع 10% زيادة PhiX.

b. بالنسبة إلى الزيادة المطلوبة فِي PhiX بنسبة 10%<، خفف PhiX إلى 6 أضعاف مِن تركيز تحميل المكتبة مع RSB واخلطه مع محلول المكتبة بمعدل 10 أضعاف للوصول إلى النسبة المطلوبة للزيادة.

مثال: بالنسبة لتركيز التحميل النهائي البالغ 100 بيكومولار، خفف PhiX إلى 0.6 نانومولار مع RSB وأضف 1 ميكرولتر مِن خليط PhiX إلى 29 ميكرولتر مِن خليط 10أضعاف مكتبة تركيز التحميل.

وتنتج الأحجام حوالي 2% زيادة فِي PhiX. تختلف النسبة المئوية حسب جودة المكتبة وكميتها.

6.   قم بالتقليب عند أعلى إعداد لمدة 3 ثوانٍ، ثم قم بالطرد لفترة وجيزة.

7.  خزّن الخليط على الثلج حتى يصبح جاهزًا للاستخدام.

يكون محلول المكتبة المخفف مستقرًا حتى 6 ساعات عند تخزينه على الثلج أو عند درجة حرارة 4 درجات مئوية.

تحميل المكتبات

1.  ارتدِ زوجًا جديدًا مِن القفازات الخالية مِن المساحيق لتجنب حدوث التلوث.

2.  استخدم مقصًا لفتح عبوة رقاقة الخرطوشة الجافة.

استخدم الخرطوشة الجافة فِي غضون 4 ساعات مِن فتح العبوة الرقاقة.

3.  أزل الخرطوشة الجافة مِن العبوة.

امسك الخرطوشة الجافة مِن الجانبين لتجنب لمس خلية التدفق.

4.  تخلص مِن حزمة الرقاقة وفقًا للمعايير المحلية المعمول بها.

5.  باستخدام طرف ماصة نظيف، اثقب مانع التسرب الرقائقي الذي يغطي الكاشف الذي يحمل ملصقًا جيدًا يُسمىLibrary (المكتبة).

6.  ماصة 250 ميكرولتر مِن محلول المكتبة المخفف فِي تجمع Library (المكتبة) فِي الخرطوشة الجافة.

7.  [Optional] (اختياري) بادئ مخصص للماصة فِي المنفذ المناسب على الخرطوشة الجافة. راجع تخصيص البادئات.