Προετοιμασία και προσθήκη προσαρμοσμένων εκκινητών

Οι προσαρμοσμένοι εκκινητές παρασκευάζονται με τη χρήση ρυθμιστικού διαλύματος προσαρμοσμένου εκκινητή NovaSeq X Series και κατόπιν προστίθενται στην κασέτα αντιδραστηρίων. Πριν συνεχίσετε, διασφαλίστε ότι η κασέτα αντιδραστηρίων έχει αποψυχθεί και επιθεωρηθεί.

Προετοιμασία προσαρμοσμένων εκκινητών

1.

Εάν έχει καταψυχθεί, αποψύξτε κάθε προσαρμοσμένο εκκινητή που θα χρησιμοποιηθεί.

2.

Χρησιμοποιήστε το ρυθμιστικό διάλυμα προσαρμοσμένου εκκινητή NovaSeq X Series για να αραιώσετε τους προσαρμοσμένους εκκινητές, προκειμένου να αποδώσετε τους ακόλουθους όγκους σε τελική συγκέντρωση 0,3 μM. Κατά τον συνδυασμό εκκινητών για την παρασκευή της προσαρμοσμένης ανάγνωσης ευρετηρίου ή οποιουδήποτε μείγματος προσαρμοσμένων εκκινητών ανάγνωσης, κάθε εκκινητής πρέπει να έχει συνολική συγκέντρωση 0,3 μM.

Προσαρμοσμένος εκκινητής	Όγκος (ml) για Κυψελίδα ροής 1,5B	Όγκος (ml) για Κυψελίδα ροής 10B ή 25B
Custom Read 1 primer	3.0	5.0
Custom Read 2 primer	3.0	5.0
Μείγμα Custom Index 1 και 2	5.0	6,0

Προσθήκη προσαρμοσμένων εκκινητών

1.

Χρησιμοποιήστε ένα μαντηλάκι θερμικής στεγανοποίησης polynit, για να καθαρίσετε τη στεγανοποίηση αλουμινίου που καλύπτει κάθε θέση του προσαρμοσμένου εκκινητή.

Position (Θέση)	Προσαρμοσμένος εκκινητής
CP1	Custom Read 1 primer
CP2	Custom Read 2 primer
CP3	Μείγμα Custom Index 1 και 2

2.

Χρησιμοποιώντας ένα καθαρό ρύγχος πιπέτας, τρυπήστε τη σφράγιση στεγανοποίησης από φύλλο αλουμινίου που καλύπτει κάθε θέση προσαρμοσμένου εκκινητή.

3.

Προσθέστε τους παρακάτω όγκους προσαρμοσμένου εκκινητή στην κατάλληλη θέση στην κασέτα αντιδραστηρίων. Αποφεύγετε να αγγίζετε τη σφράγιση στεγανοποίησης από φύλλο αλουμινίου, κατά τη διανομή του εκκινητή.

Position (Θέση)	Προσαρμοσμένος εκκινητής	Όγκος (ml) για Κυψελίδα ροής 1,5B	Όγκος (ml) για Κυψελίδα ροής 10B ή 25B
CP1	Custom Read 1 primer	3.0	5.0
CP2	Custom Read 2 primer	3.0	5.0
CP3	Μείγμα Custom Index 1 και 2	5.0	6,0