Preparación y adición de cebadores personalizados

Prepare cebadores personalizados con buffer de hibridación (HT1) y, a continuación, añádalos a los pocillos de cebador personalizado (CP) del cartucho seco de MiSeq i100 Plus. HT1 no se suministra, pero puede adquirirse por separado. Consulte Consumibles y equipos suministrados por el usuario.

Preparación de cebadores personalizados

1. Si están congelados, descongele los cebadores personalizados que vaya a utilizar.
2. Si solo utiliza bibliotecas personalizadas o de terceros, prepárelas de la siguiente manera:
• Use HT1 para diluir el cebador de lectura personalizado para obtener un volumen total de 500 µl con cada cebador de lectura personalizado en una concentración final de 0,3 µM.
• Use HT1 para diluir el cebador de índice o la mezcla de cebadores de índice personalizados para obtener un volumen total de 500 µl con cada cebador de índice personalizado en una concentración final de 0,6 µM.
3. Si utiliza genotecas personalizadas o de terceros junto con PhiX o bibliotecas Illumina, prepare sus cebadores de lectura personalizados o cebadores de índice personalizados de la siguiente manera:
• Añada cada mezcla de cebadores de lectura personalizados a 500 μl de VP21 o HP21 para obtener una concentración final de 0,3 μM.
• Añada cada mezcla de cebadores de índice personalizados a 500 μl de VP14 o BP14 para obtener una concentración final de 0,6 μM.

Adición de cebadores personalizados al cartucho seco

Consulte Cartucho seco para ver las ubicaciones de los pocillos.

1. Con una punta de pipeta limpia, perfore el sello metálico que cubre el pocillo de CP adecuado en el cartucho seco.
2. Añada 500 μl de cebador personalizado al pocillo adecuado.

Dispense el líquido lentamente para evitar derrames, burbujas y contaminación cruzada.

• CP1: puerto de reactivo para cargar cebadores de lectura 1 personalizados.
• CP2: puerto de reactivo para cargar cebadores de lectura 2 personalizados.
• CP3: puerto de reactivo para cargar cebadores de índice personalizados.