ドライカートリッジの準備

MiSeq i100 Plusシステムの消耗品は、室温で配送および保管されます。融解は必要ありません。ライブラリーをドライカートリッジにロードする前に、ライブラリーを希釈し、必要に応じてPhiXを添加します。ライブラリーは装置上で自動的に変性されます。

常に品質管理（QC）を行い、ライブラリーのローディング濃度を最適化します。

ライブラリーの希釈

1.

ウェットカートリッジのホイルパッケージをはさみで切り開き、RSBチューブとKLDチューブを取り出します。これらのチューブを脇に置きます。

2.

Resuspension Buffer（RSB）を使用して、ライブラリーを最終ローディング濃度の10培濃度に希釈します。

例：最終ローディング濃度が100 pMの場合は、1 nMに希釈します。

3.

最大の設定で3秒間ボルテックスしてから、軽く遠心します。

4.

（オプション）PhiXを次のように添加します。

a.

PhiXをRSBで最終ローディング濃度の6培濃度に希釈します。

例：最終ローディング濃度が100 pMの場合は、PhiXを0.6 nMに希釈します。

b.

この希釈液1 uLを、10倍ローディング濃度のライブラリー混合液に添加します。

これにより、PhiXの添加率は約2%になります。実際のパーセンテージはライブラリーの品質と量によって異なります。

6.

最大の設定で3秒間ボルテックスしてから、軽く遠心します。

7.

使用準備ができるまで、混合液を氷の上に置いておきます。

希釈済みライブラリー溶液は、氷上または4℃で保管した場合、最長6時間安定性が保たれます。

ライブラリーのロード

1.

コンタミネーションを防ぐため、新しいパウダーフリーの手袋を着用します。

2.

ドライカートリッジのホイルパッケージをはさみで切り開きます。

ドライカートリッジは、ホイルパッケージの開封後4時間以内に使用してください。

3.

パッケージからドライカートリッジを取り出します。

フローセルに触れないように、ドライカートリッジの側面を持ちます。

4.

ホイルパッケージを適切に廃棄します。

5.

清潔なピペットチップを使用して、「Library」と表記された試薬ウェルを覆っているホイルシールに穴を開けます。

6.

250 µLの希釈済みライブラリー溶液をドライカートリッジの「Library」ウェルにピペットで注入します。

7.

（オプション）カスタムプライマーをドライカートリッジの適切なポートにピペットで注入します。「カスタムプライマー」を参照してください。