Подгответе сув картриџ

Потрошниот материјал за MiSeq i100 Plus се испорачува и чува на собна температура. Не е потребно одмрзнување. Пред да ги ставите библиотечните материјали во сувиот картриџ, разредете ги библиотечните материјали и изборно спајкувајте го PhiX. Библиотечните материјали автоматски се денатурираат на инструментот.

Секогаш вршете анализа за контрола на квалитетот и оптимизирајте ја концентрацијата на полнење за вашиот библиотечен материјал.

Разреди библиотечен материјал

1. Користете ножици за да ја отсечете фолијата од пакувањето на влажниот картриџ за да ги извадите епруветите RSB и KLD. Ставете ги епруветите настрана.

Чувајте го влажниот картриџ во фолијата од пакувањето додека не биде подготвен за полнење. Влажниот картриџ мора да се употреби во рок од 4 часа по отворањето на фолијата.

2. Разредете го библиотечниот материјал до 10x концентрација на полнење со помош на пуфер за ресуспензија (RSB).

Пример: За конечна концентрација на полнење од 100 pM, разредете до 1 nM.

3. Вртете на највисока поставка 3 секунди, а потоа кратко центрифугирајте.
4. [Изборно] спајкување на PhiX на следниов начин.
а. Разредете го PhiX до 6x концентрација на полнење на библиотечен материјал со RSB.

Пример: За конечна концентрација на полнење од 100 pM, разредете го PhiX до 0,6 nM.

b. Додадете 1uL од ова разредување во библиотечната смеса со 10x концентрација на полнење.

Волумените произведуваат приближно 2% спајкување на PhiX. Процентот варира во зависност од квалитетот и квантитетот на библиотечниот материјал.

5. Во нова епрувета за микроцентрифуга од 1,5 мл, комбинирајте ги следните волумени за да го разредите библиотечниот материјал до конечната концентрација на полнење:
• 10x концентрација на полнење на библиотечен материјал (30 µl)
• KLD (270 µl)
6. Вртете на највисока поставка 3 секунди, а потоа кратко центрифугирајте.
7. Чувајте ја смесата на мраз додека не биде подготвена за употреба.

Разредениот раствор на библиотечен материјал е стабилен до 6 часа кога се чува на мраз или на 4ºC.

Наполни библиотечен материјал

1. Облечете нов пар ракавици без пудра за да избегнете контаминација.
2. Користете ножици за да ја отсечете фолијата од пакувањето на сувиот картриџ.

Употребете го сувиот картриџ во рок од 4 часа по отворањето на фолијата.

3. Извадете го сувиот картриџ од пакувањето.

Фатете го сувиот картриџ за страните за да избегнете допирање на проточната ќелија.

4. Фрлете ја фолијата од пакувањето соодветно.
5. Користејќи чист врв на пипета, прободете ја заптивката од фолијата што го покрива бунарот за реагенс означен со Library (Библиотечен материјал).
6. Пипетирајте 250 µl разреден бибилиотечен раствор во бунарот Библиотечен материјал во сувиот картриџ.
7. Изборно Пипетирајте го прилагодениот прајмер во соодветна порта на сувиот картриџ. Погледнете во Прилагодени прајмери.