Droge cartridge voorbereiden

Verbruiksartikelen voor de MiSeq i100 Plus worden bij kamertemperatuur verzonden en bewaard. Ontdooien is niet vereist. Voordat u de bibliotheken in de droge cartridge laadt, moet u de bibliotheken verdunnen met eventueel spike in PhiX. Bibliotheken worden automatisch op het instrument gedenatureerd.

Voer altijd een kwaliteitscontroleanalyse uit en optimaliseer de laadconcentratie voor uw bibliotheek.

Bibliotheken verdunnen

1. Gebruik een schaar om de folieverpakking van de natte cartridge open te knippen om de RSB- en KLD-buisjes eruit te halen. Leg de buisjes opzij.

Bewaar de natte cartridge in de folieverpakking totdat deze klaar is om te worden geladen. De natte cartridge moet binnen 4 uur na opening van de folieverpakking worden gebruikt.

2. Verdun bibliotheken tot 10x de laadconcentratie met behulp van Resuspension Buffer (RSB).

Voorbeeld: Verdun tot 1 nM voor een uiteindelijke laadconcentratie van 100 pM.

3. Vortex gedurende 3 seconden op de hoogste instelling en centrifugeer vervolgens eventjes.
4. [Optioneel] Spike in PhiX als volgt.
a. Verdun de PhiX tot 6x de laadconcentratie van de bibliotheek met RSB .

Voorbeeld: Verdun PhiX tot 0,6 nM voor een uiteindelijke laadconcentratie van 100 pM.

b. Voeg 1 ul van deze verdunning toe aan het bibliotheekmengsel met een laadconcentratie van 10x.

De volumes produceren een PhiX-spike van ongeveer 2%. Het percentage verschilt, afhankelijk van de kwaliteit en kwantiteit van de bibliotheek.

5. Combineer in een nieuw microcentrifugebuisje van 1,5 ml de volgende volumes om bibliotheken te verdunnen tot de uiteindelijke laadconcentratie:
• 10x bibliotheek laadconcentratie (30 μl)
• KLD (270 µl)
6. Vortex gedurende 3 seconden op de hoogste instelling en centrifugeer vervolgens eventjes.
7. Bewaar het mengsel op ijs tot het klaar is voor gebruik.

De verdunde bibliotheekoplossing is tot 6 uur stabiel wanneer bewaard op ijs of bij 4ºC.

Bibliotheken laden

1. Trek een nieuw paar poedervrije handschoenen aan om besmetting te voorkomen.
2. Gebruik een schaar om de folieverpakking van de droge cartridge open te knippen.

Gebruik de droge cartridge binnen 4 uur na het openen van de folieverpakking.

3. Verwijder de cartridge uit de verpakking.

Pak de droge patroon aan de zijkanten vast om te voorkomen dat u de stroomcel aanraakt.

4. Gooi de folieverpakking op de juiste manier weg.
5. Gebruik een schone pipetpunt en doorboor de folieafdichting die de reagens-well met het etiket Library (Bibliotheek) afdekt.
6. Pipetteer 250 μl verdunde bibliotheekoplossing in de Library well (bibliotheekwell) in de droge cartridge.
7. Optioneel Pipetteer aangepaste primer in de juiste poort op de droge cartridge. Zie Aangepaste primers.