Voor de meeste aangepaste bibliotheektypes worden de leesprimers samen gepoold in één aangepaste primerwell en de indexprimers worden samen gepoold in de andere aangepaste primerwell. Het wordt niet aanbevolen een bepalingsprimer te combineren met een indexprimer, vanwege volumebeperkingen.
In de volgende stappen hangt het gebruikte volume aangepaste primer af van de concentratie van de aangepaste primervoorraad.
|
1.
|
Indien bevroren, ontdooit u elke aangepaste primer die moet worden gebruikt. |
|
2.
|
Als u alleen aangepaste bibliotheken of bibliotheken van derden gebruikt, bereidt u aangepaste bepalingsprimers en/of aangepaste indexprimers als volgt voor. |
|
•
|
Gebruik HT1 om het aangepaste bepalingsprimermengsel te verdunnen tot een totaal volume van 600 µl met elke aangepaste bepalingsprimer bij een eindconcentratie van 0,3 µM. |
|
•
|
Gebruik HT1 om het aangepaste indexprimermengsel te verdunnen tot een totaal volume van 600 µl met elke aangepaste indexprimer bij een eindconcentratie van 0,6 µM. |
|
3.
|
Als u aangepaste bibliotheken of bibliotheken van derden naast PhiX of Illumina-bibliotheken gebruikt, bereidt u aangepaste bepalingsprimers of aangepaste indexprimers als volgt voor. |
|
•
|
Voeg elk aangepaste bepalingsprimermengsel toe aan 600 μl VP21 of HP21 voor een eindconcentratie van 0,3 μM. |
|
•
|
Voeg elke aangepaste indexprimermengsel toe aan 600 μl VP14 of BP14 voor een eindconcentratie van 0,6 μM. |
Aangepaste bepalingsprimers voorbereiden
