Klargjøre og legge til tilpassede primere

Tilpassede primere klargjøres ved hjelp av NovaSeq X Series tilpasset primerbuffer og tilsettes deretter i reagenskassetten. Kontroller at reagenskassetten er tint og inspisert før du fortsetter.

Klargjøre tilpassede primere

1.

Hvis den er frosset, tiner du hver tilpasset primer som skal brukes.

2.

Bruk NovaSeq X Series tilpasset primerbuffer til å fortynne tilpassede primere for å gi følgende volumer ved endelig konsentrasjon på 0,3 μM. Når primere kombineres for å lage den tilpassede indeksavlesningen eller en hvilken som helst tilpasset avlesningsprimerblanding, skal hver primer ha en endelig konsentrasjon på 0,3 μM.

Custom Primer (Tilpasset primer)	Volum (ml) for 1.5B-flytcelle	Volum (ml) for 10B eller 25B flytcelle
Tilpasset avlesning 1 primer	3,0	5,0
Tilpasset avlesning 2 primer	3,0	5,0
Tilpasset indeks 1- og 2-primerblanding	5,0	6,0

Legge til tilpassede primere

1.

Bruk en Polynit-varmeforseglingsserviett til å tørke av folieforseglingen som dekker hver tilpasset primerposisjon.

Posisjon	Custom Primer (Tilpasset primer)
CP1	Tilpasset avlesning 1 primer
CP2	Tilpasset avlesning 2 primer
CP3	Tilpasset indeks 1- og 2-primerblanding

2.

Bruk en ren pipettespiss til å stikke hull på folieforseglingen som dekker hver tilpasset primerposisjon.

3.

Tilsett følgende volumer av tilpasset primer i riktig posisjon på reagenskassetten. Unngå å ta på folieforseglingen mens du dispenser primeren.

Posisjon	Custom Primer (Tilpasset primer)	Volum (ml) for 1.5B-flytcelle	Volum (ml) for 10B eller 25B flytcelle
CP1	Tilpasset avlesning 1 primer	3,0	5,0
CP2	Tilpasset avlesning 2 primer	3,0	5,0
CP3	Tilpasset indeks 1- og 2-primerblanding	5,0	6,0