Como funciona o sequenciamento

Biblioteca Uma amostra de DNA ou RNA que tem adaptadores anexados para sequenciamento. Os métodos de preparação variam. é desnaturada automaticamente em fitas simples e depois diluída dentro do instrumento. Durante a clusterização, moléculas de DNA em fita simples são ligadas à superfície da lâmina de fluxo e amplificadas para formar clusters Um grupo clonal de fitas de DNA em uma lâmina de fluxo que produzem uma leitura sequencial. Cada fita de DNA em uma lâmina de fluxo semeia um modelo que é amplificado até que o cluster consista em centenas de milhares de cópias. Por exemplo, uma lâmina de fluxo com 10.000 clusters produz 10.000 leituras únicas ou 20.000 leituras de extremidades pareadas. A clusterização dura ~4 horas.

A imagem dos clusters é feita utilizando química de dois canais (um canal verde e um canal azul) para codificar dados para os quatro nucleotídeos. Depois que a imagem de um bloco na lâmina de fluxo é concluída, obtém-se a imagem do próximo bloco. O processo é repetido para cada ciclo de sequenciamento. Após a análise de imagens, o software Real-Time Analysis executa identificação de bases Determinando uma base (A, C, G ou T) para cada cluster em um bloco em um ciclo específico., filtrando e pontuando a qualidade. Calcula um conjunto de preditores de qualidade para cada identificação de bases e usa esses valores para consultar o Q-score.

À medida que a corrida avança, o software de controle transfere automaticamente arquivos de identificação de base concatenados Contém a identificação de bases e a pontuação de qualidade associada para cada cluster de cada ciclo de sequenciamento. (*.cbcl) para a pasta de saída especificada para análise de dados. Durante a corrida do sequenciamento, o software do Real-Time Analysis realiza análise de imagens e identificação de bases. Quando o sequenciamento é concluído, inicia-se a análise secundária. O método de análise de dados secundária depende do aplicativo e da configuração do sistema.

Quando a análise de sequenciamento inicial é concluída, o DRAGEN realiza uma análise secundária com um dos pipelines de análise disponíveis.