Primers personalizados
A utilização de primers personalizados para um ensaio num NextSeq 1000/2000 Sequencing System requer os seguintes passos adicionais, durante a configuração do ensaio:
| • | Prepare e adicione o volume adequado de cada primer personalizado à posição do primer personalizado do cartucho de reagente. |
| • | Selecione os primers personalizados no software de controlo, durante a configuração do ensaio. |
Todos os outros passos seguem o fluxo de trabalho de configuração do ensaio descrito em Configurar Modo de Ensaio.
O NextSeq 1000/2000 permite a utilização de até dois primers de leitura personalizados ou dois primers de índice personalizados, por poço de primer personalizado. Existem dois poços de primers personalizados disponíveis, permitindo a utilização de até quatro primers personalizados por ensaio.
Dependendo do seu kit de preparação da biblioteca, poderá ser necessário utilizar misturas de primers Illumina. Quando utilizar reagentes químicos XLEAP-SBS, consulte Primers personalizados VP21 e VP14 e Primers personalizados BP14 e HP21 para obter mais informações. Os kits primer de índice e de leitura XLEAP-SBS e SBS padrão podem ser utilizados de forma intermutável para todas as preparações da biblioteca Illumina, exceto para a Illumina DNA PCR-Free Library Prep. O cartucho XLEAP-SBS já contém os primers para a Illumina DNA PCR-Free Library Prep, mas o cartucho SBS padrão não contém.
A Illumina não pode garantir o desempenho ou compatibilidade dos primers personalizados. É responsável por validar os primers personalizados para sequenciação no NextSeq 1000/2000 Sequencing System.
Primers personalizados e PhiX
Quando os primers personalizados são selecionados no software de controlo durante a configuração do ensaio, o software direciona o sistema para retirar reagentes dos poços Personalizado 1 e Personalizado 2. Os primers Illumina não são utilizados para o ensaio de sequenciação. Primers Illumina refere-se aos primers que já se encontram no cartucho de reagente.
Para ser sequenciado, o controlo PhiX requer os primers Illumina padrão. Se não forem utilizados primers Illumina para a Leitura 1 ou Leitura 2, o controlo PhiX opcional não é sequenciado. Os primers Illumina têm de ser adquiridos separadamente para permitir a purga de PhiX e outras bibliotecas Illumina quando são utilizados primers personalizados. Consulte a secção Preparar e Adicionar Primers Personalizados, para obter informações adicionais.
Uma vez que o PhiX não é indexado, os dados de sequenciação do controlo PhiX não são gerados para leituras de índice, independentemente do primer de indexação utilizado.
Primers personalizados VP21 e VP14
Se o seu kit de preparação da biblioteca necessitar do VP21 Custom Read 1 Primer ou do VP14 Custom Index 2 Primer, prossiga para Adicionar primers personalizados ao cartucho de reagente. Os primers personalizados VP21 e VP14 são fornecidos na concentração de trabalho adequada e não requerem preparação. VP21 contém VP10 para bibliotecas Illumina DNA PCR-Free.
Primers personalizados BP14 e HP21
Se o seu kit de preparação da biblioteca necessitar do BP14 Custom Read 1 Primer ou do HP21 Custom Index 2 Primer, prossiga para Adicionar primers personalizados ao cartucho de reagente. Os primers personalizados BP14 and HP21 são fornecidos na concentração de trabalho adequada e não requerem preparação.
