Como funciona a sequenciação

A biblioteca Uma amostra de ADN ou ARN que tem adaptadores ligados para sequenciação. Os métodos de preparação variam. é automaticamente desnaturada em cadeias únicas e é novamente diluída no instrumento. Durante a produção de clusters, as moléculas individuais de ADN são ligadas à superfície da célula de fluxo e amplificadas para formar clusters Um grupo clonado de cadeias de ADN numa célula de fluxo que produz uma leitura de sequenciação. Cada cadeia de ADN numa célula de fluxo semeia um modelo que é amplificado até o cluster ser composto por centenas ou milhares de cópias. Por exemplo, uma célula de fluxo com 10 000 clusters produz 10 000 leituras individuais ou 20 000 leituras de extremidades emparelhadas.. A produção de clusters demora ~4 horas.

É criada uma imagem dos clusters utilizando a química de dois canais (um canal verde e um canal azul) para codificar os dados para os quatro nucleótidos. Após a aquisição de imagens de um bloco na célula de fluxo, é criada a imagem do bloco seguinte. O processo é repetido para cada ciclo de sequenciação. Após a análise de imagens, o software Real-Time Analysis realiza a identificação de bases, Determinar uma base (A, C, G ou T) para cada cluster num mosaico num ciclo específico. filtragem e pontuação de qualidade. Calcula um conjunto de indicadores preditivos de qualidade para cada identificação de bases e, em seguida, usa o valor preditivo para procurar uma pontuação-Q.

À medida que o ensaio progride, o software de controlo transfere ficheiros de identificação de bases concatenados Contém a identificação de base e a pontuação de qualidade associada para cada cluster de cada ciclo de sequenciação. (*.cbcl) para a pasta de saída para análise de dados. Durante o ensaio de sequenciação, o software Real-Time Analysis efetua a análise de imagens e a identificação de bases. Quando a sequenciação estiver concluída, a análise secundária é iniciada. O método da análise secundária de dados depende da aplicação e da configuração do sistema.

Após a conclusão da análise primária inicial, o DRAGEN executa uma análise secundária utilizando um dos pipelines de análise disponíveis no modo de análise selecionado.