Förbered torrkassett
MiSeq i100 Plus förbrukningsmaterial levereras och förvaras i rumstemperatur. Upptining krävs inte. Innan du laddar biblioteken i den torra kassetten ska du späda biblioteken och eventuellt spika i PhiX. Bibliotek denatureras automatiskt i instrumentet.
Utför alltid en kvalitetskontrollsanalys och optimera inläsningskoncentrationen för biblioteket.
Späda ut bibliotek
|
1.
|
Använd sax för att klippa upp den våta kassettens folieförpackning för att ta fram RSB- och KLD-rören. Lägg rören åt sidan. |
Förvara den våta kassetten i folieförpackningen tills den är klar att laddas. Den våta kassetten måste användas inom fyra timmar efter att folieförpackningen öppnats.
|
2.
|
Späd biblioteken till 10 x laddningskoncentration med resuspension buffer (RSB). |
Exempel: För en slutlig laddningskoncentration på 100 pM, späd till 1 nM.
|
3.
|
Vortexblanda vid den högsta inställningen i tre sekunder och centrifugera sedan kort. |
|
4.
|
[Valfritt] Spika PhiX enligt följande. |
|
a.
|
Späd PhiX till 6 x biblioteksladdningskoncentration med RSB. |
Exempel: För en slutlig laddningskoncentration på 100 pM, späd PhiX till 0,6 nM.
|
b.
|
Tillsätt 1uL av denna spädning till biblioteksblandningen med 10 x laddningskoncentration. |
Volymerna producerar cirka 2 % PhiX-spik. Procentsatsen varierar beroende på bibliotekets kvalitet och kvantitet.
|
5.
|
I ett nytt 1,5 ml mikrocentrifugrör, kombinera följande volymer för att späda biblioteken till den slutliga laddningskoncentrationen: |
|
•
|
10 x laddningskoncentrationsbibliotek (30 μl) |
|
6.
|
Vortexblanda vid den högsta inställningen i tre sekunder och centrifugera sedan kort. |
|
7.
|
Förvara blandningen på is tills den ska användas. |
Den spädda bibliotekslösningen är stabil i upp till sex timmar vid förvaring på is eller vid 4ºC.
Ladda bibliotek
|
1.
|
Ta på dig ett nytt par puderfria handskar för att undvika kontaminering. |
|
2.
|
Använd sax för att klippa upp den folieförpackningen med torrkassett. |
Använd torrkassetten inom fyra timmar efter att folieförpackningen öppnats.
|
3.
|
Ta ut den torra kassetten ur folieförpackningen. |
Fatta tag i den torra kassetten vid sidorna för att undvika att röra vid flödescellen.
|
4.
|
Kassera folieförpackningen på lämpligt sätt. |
|
5.
|
Använd en ren pipettspets för att genomborra folieförseglingen som täcker reagensbrunnen märkt Library (Bibliotek). |
|
6.
|
Pipettera 250 μl spädd bibliotekslösning i biblioteksbrunnen i den torra kassetten. |
|
7.
|
Valfritt Pipettera anpassad primer till lämplig port på torrkassetten. Se Anpassade primrar. |
