Sekanslamanın Çalışma Biçimi

Kütüphane Sekanslama için ekli adaptörler bulunan bir DNA veya RNA numunesidir. Hazırlık modları değişkenlik gösterir. otomatik olarak tekli zincirlere denşirilir ve cihaz üzerinde ek seyreltme işlemine tabi tutulur. Küme oluşturma sırasında tekli DNA molekülleri akış hücresinin yüzeyine bağlanır ve kümeAkış hücresindeki bir klonal DNA zinciri grubudur ve bir sekanslama okuması üretir. Akış hücresindeki her bir DNA zinciri, küme yüzlerce ya da binlerce kopya içerene dek amplifiye edilen bir şablon çekirdeği oluşturur. Örneğin, 10.000 küme içeren bir akış hücresi 10.000 tekli okuma ya da 20.000 çift sonlu okuma üretir. oluşturmak üzere amplifiye olur. Küme oluşturma işlemi ~4 saat sürer.

Kümeler, dört nükleotidin verilerini şifrelemek için iki kanallı kimya (bir yeşil kanal ve bir mavi kanal) kullanılarak görüntülenir. Akış hücresindeki bir kutucuk görüntülendikten sonra sonraki kutucuk görüntülenir. İşlem, her sekanslama döngüsü için tekrar edilir. Görüntü analizinin ardından Real-Time Analysis yazılımı baz arama, Belirli bir döngüde bir kutucuğa ait her küme için bazı (A, C, G veya T) belirleme işlemidir. filtreleme ve kalite skoru işlemlerini gerçekleştirir. Her bir baz arama için bir dizi kalite tahmin unsurunu hesaplar ve ardından bu tahmin unsuru değerini kullanarak Q skorunu arar.

Çalıştırma ilerledikçe, denetim yazılımı otomatik olarak baz arama dosyalarını (*.cbcl) Her sekanslama döngüsünün her bir kümesi için baz aramayı ve ilişkili kalite skorunu içerir. veri analizi için belirtilen çıktı klasörüne aktarır. Real-Time Analysis yazılımı, sekanslama çalıştırması sırasında görüntü analizi ve baz arama işlemlerini gerçekleştirir. Sekanslama tamamlandığında ikincil analiz başlar. İkincil veri analizi yöntemi uygulamanıza ve sisteminizin konfigürasyonuna bağlıdır.

Birincil sekanslama analizinin tamamlanmasının ardından DRAGEN, kullanılabilir analiz veri hatlarından birinden yararlanarak seçili analiz modunda ikincil analiz gerçekleştirir.