测序的原理

文库 已连接接头以供测序的 DNA 或 RNA 样本。制备方法各不相同。自动变性为单链并在仪器上进一步稀释。在簇生成期间，单个 DNA 分子会结合到流动槽的表面，并进行扩增以形成簇。流动槽上产生一个测序片段的克隆 DNA 链群。流动槽上的每条 DNA 链都会形成一个模板，该模板会扩增，直到簇包含成百上千个拷贝。例如，含有 10,000 个簇的流动槽会生成 10,000 个单端或者 20,000 个双端读段。簇生成大约需用时 4 小时。

系统通过双通道化学反应（一个绿色通道和一个蓝色通道）来对簇成像，以便对四种核苷酸的数据编码。对流动槽上的一个小区成像后，随即会对下一个小区进行成像。此过程会针对测序的每个循环重复进行。在图像分析之后，Real-Time Analysis 软件执行碱基调用 确定特定循环中小区内每个簇的碱基（A、C、G 或 T）。，过滤和质量评分。 计算每个碱基检出的一组质量预测因素，然后使用预测因素值来查阅 Q-score。

随着运行的进行，控制软件会自动将串联的碱基调用文件 包含每个测序周期中每个簇的碱基检出和相关质量分值。 (*.cbcl) 传输到指定的输出文件夹进行数据分析。测序运行期间，Real-Time Analysis 软件会执行图像分析、碱基检出。测序完成时，便会开始二级分析。二次数据分析方法视应用程序和系统配置而定。

初始主要分析完成后，DRAGEN 会在选定的分析模式下使用可用的分析管道之一执行二次分析。