稀释和变性文库

1.

使用 RSB 将文库稀释至 2 nM。

2.

[25B] 在新的 1.5 ml 微量离心管中，使用 RSB 将文库稀释至所需的最终装入浓度。

最终剂量应为每个样本孔 56 µl。

3.

[10B，1.5B] 在新的 1.5 ml 微量离心管中，使用 RSB 将文库稀释至所需的最终装入浓度。

最终剂量应为每个样本孔 34 µl。

4.

【可选】按以下步骤注入 1% 至 2% 未变性 PhiX。

添加 PhiX 时，建议采用 1% 的量，以确保文库均衡。低多样性文库所需的剂量可能会更多。要将 PhiX 对照品与低多样性文库结合使用，请联系 Illumina 技术支持部门以获取相关指导。

a.

量化 PhiX。

b.

使用 RSB 将 10 nM PhiX 稀释至 300 pM。

c.

[25B] 向 56 μl 未变性文库中加入 1.6 μl 稀释 PhiX。

d.

[10B，1.5B] 向 34 μl 未变性文库中加入 1 μl 稀释 PhiX。

1.

[25B] 向未变性文库试管和可选 PhiX 中加入 14 µl 0.2 N NaOH。

2.

[10B，1.5B] 向未变性文库试管和可选 PhiX 中加入 8.5 µl 0.2 N NaOH。

3.

盖上盖子，然后稍作振荡。

4.

在室温下孵育 5 分钟以变性。

5.

[25B] 加入 210 µl 预装载缓冲液 进行中和。

6.

[10B，1.5B] 加入 127.5 µl 预装载缓冲液 进行中和。

7.

盖上盖子，然后稍作振荡。

8.

以 280 × g 的转速离心最多 1 分钟。

9.

将文库储存在冰上，直至转移至文库试管条（请参阅装载冻干嵌件和文库试管条部分）。