自訂引子
在執行設定期間,在 NextSeq 1000/2000 定序系統上使用自訂引子進行執行需要下列額外步驟:
• | 準備自訂引子,並將適當體積的每個自訂引子加入試劑匣的自訂引子位置。 |
• | 在執行設定期間,選擇控制軟體中的自訂引子。 |
所有其他步驟均遵循「設定執行模式」中所述的執行設定工作流程。
NextSeq 1000/2000 允許每個自訂引子孔使用最多兩個自訂讀取引子或兩個自訂索引引子。有兩個可用的自訂引子孔,每次執行最多可使用四個自訂引子。
根據您的基因庫準備試劑組,您可能需要使用 Illumina 引子混合物。使用 XLEAP-SBS 化學試劑時,請參閱 VP21 和 VP14 自訂引子,以及 BP14 和 HP21 自訂引子以取得更多資訊。XLEAP-SBS 和標準 SBS Read and Index Primer Kits 均可交互用於除 Illumina DNA PCR-Free Library Prep 以外的所有 Illumina 基因庫準備。XLEAP-SBS 匣已包含 Illumina DNA PCR-Free Library Prep 的引子,但標準 SBS 匣未包含。
Illumina 無法保證自訂引子的性能或相容性。您有責任在 NextSeq 1000/2000 定序系統上對用於定序的自訂引子進行效果驗證。

執行設定期間在控制軟體中選擇自訂引子時,該軟體會引導系統從自訂 1 孔和自訂 2 孔吸取試劑。在定序執行期間,Illumina 引子不會用於讀數或索引。Illumina 引子是指已經在試劑匣孔中的引子。
PhiX 對照需要標準 Illumina 引子才能定序。如果 Illumina 引子未用於讀數 1 或讀數 2,將不會針對選用的 PhiX 對照進行定序。Illumina 引子必須另外購買,以便在使用自訂引子時,使 PhiX 和其他 Illumina 基因庫進行引子結合。有關其他資訊,請參閱「準備並新增自訂引子」部分。
由於未針對 PhiX 進行索引編製,因此無論使用哪個索引引子,PhiX 對照都不會產生索引讀數的定序資料。

如果您的基因庫準備試劑組需要 VP21 自訂讀取 1 引子或 VP14 自訂索引 2 引子,請參閱「添加自訂引子至試劑匣」。VP21 和 VP14 自訂引子以適當的工作濃度提供,不需要準備。VP21 包含可用於 Illumina DNA PCR-Free 基因庫的 VP10。

如果您的基因庫準備試劑組需要 BP14 自訂讀取 1 引子或 HP21 自訂索引 2 引子,請參閱「添加自訂引子至試劑匣」。BP14 和 HP21 自訂引子以適當的工作濃度提供,不需要準備。