標準 SBS 定序注意事項
開始協定之前,請檢閱下列資訊以為稀釋基因庫和設定執行做準備。達到最佳載入濃度是成功完成定序和分析的關鍵。輸入讀數中的正確循環數可協助確保最佳資料輸出。
有關在 BaseSpace Sequence Hub 規劃執行的資訊,請參閱 BaseSpace Sequence Hub。
有關載入體積和濃度的資訊,請參閱變性和稀釋操作程序產生器。
每個讀數最少輸入 26 次循環、最多 301 次循環,均可確保資料品質。精確的循環數需依據您的實驗而定。NextSeq 1000/2000 控制軟體要求讀數 1 至少有 1 次循環,但當讀數 1 中的循環數低於 26 時會顯示警告。
讀數 1、索引 1、索引 2 及讀數 2 的總循環數不可大於組件支援的循環數加上 38 次循環(適用於 100 次循環、200 次循環及 600 次循環試劑組)和 27 次循環(適用於 P3 300 次循環試劑組)。當索引 1 和索引 2 少於 6 次循環時,NextSeq 1000/2000 控制軟體會顯示警告。如果索引 1 或索引 2 為 0 次循環,則不會顯示警告。
最少和最多循環數包含額外循環。請務必在需要的讀數長度上多加一次循環,以修正定相延遲和定相超前的效果。讀數長度是讀數一和讀數二中的定序循環數,不包含額外循環和索引循環。如需詳細資訊,請參閱「Real-Time Analysis 工作流程」中的「定相延遲校正」。
執行設定範例:
• | 若讀數長度為 35(單一讀數),請在 [Read 1](讀數 1)欄位中輸入 36。 |
• | 若每個讀數的讀數長度為 150(雙端),請在 [Read 1](讀數 1)欄位中輸入 151,在 [Read 2](讀數 2)欄位中輸入 151。 |
• | 若每個讀取的讀取長度為 300(雙端),請在 [Read 1](讀數 1)欄位中輸入 301,在 [Read 2](讀數 2)欄位中輸入 301。 |